细胞生物学
1.流式检测
技术原理：流式细胞术是一种对悬浮细胞进行快速、多参数定量分析和分选的技术。其原理是：使单细胞悬液在鞘液的包裹下，高速通过激光检测区；细胞上的荧光染料或荧光标记抗体被激光激发，产生散射光和荧光信号；这些信号被探测器接收并转化为电信号，经计算机处理后可分析细胞的大小、粒度、表型、细胞周期、凋亡率等。
实验流程：
交付标准：
原始数据：提供流式细胞仪导出的.FCS格式原始数据文件。
实验报告：包含样本信息、所用抗体/染料详情、仪器型号、分析方案（Gatig Strategy）。
分析结果：提供统计结果（如阳性细胞百分比、平均荧光强度、细胞周期各时相比例等）及分析图（散点图、直方图）。
2.细胞增殖（CCK8、MTT）
技术原理：
CCK-8：试剂中含有水溶性的四唑盐WST-8，它在细胞线粒体脱氢酶的作用下被还原为橙黄色的甲臜产物，该产物溶于培养基，颜色深度与活细胞数量成正比。
MTT：试剂中的四唑盐MTT被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为不溶于水的蓝紫色甲臜结晶，结晶经DMSO溶解后，通过检测吸光度来反映细胞数量。
实验流程：
交付标准
原始数据：提供酶标仪导出的各孔OD值原始数据。
实验报告：包含细胞系、接种密度、试剂品牌、孵育时间等详细信息。
分析图表：提供细胞活力曲线（折线图或柱状图），并计算IC50等关键参数（如适用）。
3.细胞凋亡
技术原理：
常用Aexi V-FITC/PI双染法。其原理基于：
Aexi V-FITC：与早期凋亡细胞外翻的磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合。
碘化丙啶（PI）：一种核酸染料，不能透过完整细胞膜，但可穿过晚期凋亡和坏死细胞的细胞膜而使细胞核染红。
通过流式细胞术可区分活细胞（Aexi V-/PI-）、早期凋亡细胞（Aexi V+/PI-）、晚期凋亡细胞（Aexi V+/PI+）和坏死细胞（Aexi V-/PI+）。
实验流程：
交付标准
原始数据：提供.FCS格式原始数据文件。
实验报告：详细记录实验步骤、试剂盒品牌。
分析结果：提供流式细胞术散点图，以及各象限（Q1-Q4）细胞百分比的统计分析表格和图表。
4.细胞迁移（traswell、划痕）
技术原理：
Traswell迁移：利用一种称为Traswell小室的装置，其内部有一张带有微孔（通常直径为8μm）的聚碳酸酯膜。将细胞接种于上室，下室中加入含有趋化因子（如胎牛血清FBS或特定细胞因子）的培养基。细胞在趋化因子的诱导下，会主动迁移穿过微孔，到达下室底面。通过对迁移至下室底面的细胞进行染色和计数，即可定量评估细胞的迁移能力。
细胞划痕：也称为伤口愈合。在培养板中培养的细胞形成致密单层后，用无菌枪头或划痕器在细胞层上制造一道无细胞的“划痕”。然后继续培养，并通过显微镜定期观察和拍照，记录细胞向划痕区域迁移、直至“愈合”的过程。通过测量划痕面积随时间的变化，可以定量分析细胞的横向迁移能力。
实验流程：
Traswell迁移实验流程：
细胞划痕实验流程：
交付标准：
原始图像：提供Traswell下室膜的显微镜照片（多个随机视野）或划痕实验各时间点的显微镜照片。
实验报告：包含详细的实验方法，如细胞种类、接种密度、培养时间、趋化因子种类（Traswell）等。
定量结果：Traswell：提供每个视野的迁移细胞计数，以及不同实验组间的统计分析图表（柱状图）。细胞划痕：提供各时间
点的划痕面积或愈合率数据，以及迁移曲线和统计分析。
5.细胞侵袭
技术原理：
细胞侵袭是细胞迁移的一种特殊形式，特指细胞穿过细胞外基质（ECM）或基底膜的能力，这在肿瘤转移过程中至关重要。该实验在Traswell迁移的基础上进行改进：在Traswell上室的微孔膜上预先铺覆一层基质胶（Matrigel），这是一种从Egelbreth-Holm-Swarm小鼠肉瘤中提取的基底膜基质，能模拟体内的细胞外基质屏障。只有那些能够分泌蛋白酶（如基质金属蛋白酶MMPs）来降解基质胶，并同时具有运动能力的细胞，才能穿过这层屏障进入下室。因此，计数下室的细胞反映的是细胞的侵袭能力。
实验流程：
交付标准：
原始图像：提供Traswell下室膜的显微镜照片（多个随机视野），清晰显示已侵袭的细胞。
实验报告：详细记录实验方法，包括基质胶的型号、铺胶浓度与体积、细胞接种量、培养时间等。
定量结果：提供每个视野的侵袭细胞计数，以及不同实验组间的统计分析图表（柱状图）。通常会将侵袭实验结果与迁移结果
结合分析，全面评估细胞的转移潜能。
6.血管形成
技术原理：
在体外模拟体内血管生成的过程。将基质胶铺在孔板中，使其在37℃下聚合形成类似体内基底膜的结构。然后将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）等接种于基质胶上，内皮细胞会迁移、分化、连接，并形成管状网络结构。通过计数网络节点、网格数等参数来评价化合物的促血管生成或抑制血管生成活性。
实验流程：
交付标准
原始图像：提供不同视野下管状结构的典型显微镜照片。
实验报告：记录所用细胞、基质胶品牌、细胞接种量、培养时间等。
分析结果：提供管状网络的分析数据，如节点数、网格数、总管状长度等，并附上统计分析。
7.克隆形成
技术原理：
评估单个细胞增殖能力和群体依赖性的金标准。将少量细胞接种于培养皿中，培养一段时间（1-3周），期间单个细胞会持续分裂形成一个肉眼可见的细胞集落（通常>50个细胞）。通过染色并计数集落数量，可以反映细胞的存活率、增殖能力和对药物/处理的敏感性。
实验流程：
交付标准：
原始图像：提供整个培养皿的克隆扫描图像或典型区域照片。
实验报告：记录细胞系、接种数量、培养时间、处理信息等。
定量结果：提供克隆计数、克隆形成率（克隆数/接种细胞数×100%）及统计分析图表。
8.细胞焦亡
技术原理：
细胞焦亡是一种Gasdermi家族蛋白介导的程序性细胞坏死，与炎症密切相关。检测方法多样，包括：
形态学观察：细胞胀大、膜破裂、形成气泡状凸起。
Wester Blot：检测焦亡关键蛋白（如GSDMD, GSDME）的剪切活化。
ELISA：检测上清中释放的炎症因子（如IL-1β, IL-18）。
荧光染色：使用针对GSDMD-端的抗体进行免疫荧光染色，或使用PI染料标记膜破裂的细胞。
实验流程：
交付标准：
原始数据：根据所选方法，提供WB原始图、ELISA数据、荧光图像等。
实验报告：详细记录所用方法、抗体、试剂盒信息。
综合分析报告：结合多种检测方法的结果，对细胞是否发生焦亡及其程度进行专业判读。
9.EDU细胞增殖
技术原理：
EdU（5-乙炔基-2’-脱氧尿苷）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，在DA复制期可掺入新合成的DA中。EdU的乙炔基能与带有荧光染料的叠氮化物在铜催化下发生高效的“点击化学反应”，从而通过荧光显微镜或流式细胞术直接检测到正在进行DA合成的增殖细胞。与传统BrdU检测相比，无需DA变性，步骤更简便。
实验流程：
交付标准：
原始图像/数据：提供荧光显微镜照片或流式细胞术的.FCS文件。
实验报告：包含EdU孵育时间、点击化学试剂品牌、检测仪器等。
定量结果：提供EdU阳性细胞率（增殖指数）的统计分析图表。
